影響培養基*滅菌的因素很多，除了培養基中雜菌的種類和數量、滅菌溫度和時間長度外，還取決于:
1.營養的維持。
濕熱滅菌殺死微生物的同時，培養基的營養成分也受到一定程度的破壞，尤其是氨基酸和維生素。比如在121℃下僅20分鐘，賴氨酸、精氨酸等堿性氨基酸就有59%被破壞，還有相當數量的蛋氨酸、色氨酸也被破壞。在熱量的作用下，一些營養物質可能會因熱量而相互反應，導致培養基中原有的營養物質發生變化，從而影響培養基的質量。
2.微生物的耐熱性。
細菌孢子耐熱性高，滅菌所需時間取決于將細菌孢子減少到規定數量所需的時間。
3.pH值。
pH值對微生物的耐熱性影響很大。當pH值在6.0-8.0之間時，微生物死亡的可能性極小。pH<6.0時，微生物容易死亡，H+容易滲入微生物細胞，從而改變細胞的生理反應，促進其死亡。因此，培養基的pH值越低，所需時間越短。
4.培養基的組成。
由油、糖、蛋白質組成的高濃度有機物會在細胞周圍形成一層薄膜，影響熱傳導。然而，鹽和色素的高濃度削弱了其耐熱性，使殺菌更容易。例如，大腸桿菌在水中加熱至60-65℃時死亡，在10%糖溶液中在70℃加熱4-6分鐘，在30%糖溶液中加熱30分鐘。一般含糖量高的時候，11111111選擇115C30分鐘；一般培養基可選擇121℃培養20分鐘。
5.泡沫。
泡沫中的空氣形成隔熱層，使熱量難以滲入，殺死雜菌。
6.顆粒。
小顆粒容易殺菌，大顆粒難殺菌。含有少量較大顆粒和粗纖維的介質可通過粗過濾去除(這不應影響介質質量)。培養基結塊會導致培養基滅菌不*。
7.滅菌鍋內空氣是否排出。
這是影響殺菌的關鍵點，也就是溫度和壓力的比例關系。同樣的壓力下，如果空氣沒有排出，也就是說沒有用純蒸汽滅菌，此時的溫度可能達不到目的要求，會嚴重影響滅菌效果。
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