GE Ficoll Paque Premium 淋巴細胞分離液

產品名稱：GE Ficoll Paque Premium 淋巴細胞分離液        

產品貨號：17-5442-02

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產品名稱：Ficoll Paque Premium,1.077g/mL 淋巴細胞分離液 

產品貨號：17-5442-02

產品說明：

Ficoll-Paque PREMIUM系列有1.073，1.077，1.084 g/ml三種密度可供選擇。

用于通過密度梯度離心從外周血、骨髓和臍帶血中制備不同密度的人單個核細胞

生產過程符合GMP、ISO 13485:2003及美國藥典(USP)標準

無菌即用型

通過檢驗確證，內毒素含量很低(＜0.12 EU/ml)

Ficoll-Paque PREMIUM有RSF文件，

Ficoll-Paque PREMIUM改良于Ficoll-Paque PLUS，后者作為一種從骨髓、外周血和臍帶血中高得率分離單個核細胞的無菌密度梯度介質已應用了三十多年。與Ficoll-Paque PLUS不同的是，F(xiàn)icoll-Paque PREMIUM的生產是在嚴格控制環(huán)境下完成的, 生產條件符合ISO 13485:2003標準，GMP認證和美國藥典的建議，可用于生產細胞治療相關產品。

產品介紹：

采用推薦的方法分離人外周血獲得的單核細胞懸液具有以下特點：

● 分離所得的細胞中95 ± 5%為單核細胞

● 分離所得的細胞存活細胞率 > 90%

● 可回收原始的血液樣本中60 ± 20%的單核細胞

● 3 ± 2%的粒細胞

● 5 ± 2%的紅細胞

應用

Ficoll-Paque PREMIUM

用于從人外周血，骨髓和臍帶血中分離單個核細胞

Ficoll-Paque PREMIUM 1.084

用于分離較高密度的人單核細胞，還可以用于分離小鼠和大鼠的血細胞

Ficoll-Paque PREMIUM 1.073

用于分離較低密度的人單核細胞, 如基質細胞或單核細胞

Ficoll-Paque PREMIUM密度為1.077 g/ml，經過優(yōu)化用于從人

外周血分離單核細胞，所采用的方法為由Boyum (3) 改進的

簡便快速的離心方法。此介質亦可用于從包括骨髓和臍帶血

等組織來源中分離人單核細胞。采用推薦的方法分離人外周

密度梯度離心原理

見圖，以人外周血為例，血液加入Ficoll-Paque密度梯度分離液后離心分層，從上到下分四層：

血漿層

單個核細胞層：淋巴細胞、單核細胞、血小板（骨髓和臍帶血等樣本還有間充質干細胞）

Ficoll-Paque分離液層：密度1.077g/mL

紅細胞、粒細胞層

紅細胞和多形核粒細胞比重較大，為1.092左右，而淋巴細胞和單核細胞比重較小，為1.075～1.090。Ficoll-Paque密度1.077g/mL介于兩者之間，并且分離液中的Ficoll PM400是一種高聚糖，能促進紅細胞凝集。

操作步驟

使用前把Ficoll-Paque density gradient media加熱到18°C - 20°C。若樣本量超過3mL，換用直徑更大的離心管，以保證Ficoll-Paque 分離液：2.4 cm，血液樣本：3.0 cm的高度。

樣本制備

使用新鮮血液確保所分離的單個核細胞的活性。樣本也要加熱到18°C - 20°C。

1. 10mL離心管加入2mL抗凝血和等量的平衡鹽溶液。

2. 顛倒或吸管混勻血液和緩沖液。

單個核細胞分離步驟

1. Ficoll-Paque試劑瓶顛倒多次混勻。

注射器法吸取Ficoll-Paque分離液：

見圖，去掉聚丙烯蓋，插入注射器針頭。

吸管法吸取Ficoll-Paque分離液：

去掉聚丙烯蓋，拉起鋁環(huán)，拉開金屬密封，移除銀環(huán)。拿掉橡膠密封，無菌操作吸取需要的Ficoll-Paque分離液。

離心管加入3mLFicoll-Paque分離液。

稀釋過的血液樣本小心鋪到Ficoll-Paque分離液上面。

注意：鋪樣本時小心不要和Ficoll-Paque分離液混合。

離心400g，30-40min。18°C - 20°C。

用無菌吸管吸掉上層血漿和血小板，不要碰到單個核細胞層（圖4，圖5）。

無菌吸管轉移單個核細胞層到無菌離心管。

洗滌分離細胞

1. 預估轉移的單個核細胞的體積。加入至少3倍體積的平衡鹽溶液（約6mL）。

2. 用吸管輕柔重懸細胞。

3. 離心，400-500g，10-15min，18°C - 20°C。

注意：高速離心會加速單個核細胞的回復。但是，低速離心（60-100g）能去除血小板。

4. 去掉上清。

5. 6-8mL平衡鹽溶液重懸單個核細胞。

6. 離心，400-500g（或60-100g），10min，18°C - 20°C。

7. 去上清。

8. 使用下游所需液體重懸細胞沉淀。

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Corning  25-072-CV    LSM (Lymphocyte Separation Medium)              500mL   

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